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如何選擇超濾產(chǎn)品
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賽多利斯提供了可滿足各種超濾要求的膜，選擇超濾膜主要根據(jù)膜的材質(zhì)，截留分子量以及綜合性能等，但是應(yīng)注意，膜的最終性能還取決于所需進(jìn)行超濾的溶液的特性，建議采用不同的膜進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以選出最適合的膜。
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不同材質(zhì)超濾膜的特點(diǎn)
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聚醚砜
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三醋酸纖維素
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| (Polyethersulfone) |
(Cellulose Triacetate) |
| 這是一種用于常規(guī)目的的濾膜，尤其在回收大分子截留物時(shí)，可以得到極好的收率。聚醚砜具有較高的化學(xué)和熱穩(wěn)定性，通量大，流速快，耐堿能力強(qiáng)(pH范圍1 ~ 14) |
也是一種高度親水的膜，對(duì)蛋白的吸附極低，用于從低蛋白濃度的稀釋液中回收蛋白時(shí)，可以得到極高的收率。再生纖維素可以高壓滅菌，容易清洗，耐酸堿性能及耐溶劑性能好 |
再生纖維素
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Hydrosart
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| (Regenerated Cellulose) |
(Hydrosart) |
| 這種膜親水性強(qiáng)，非特異性吸附極低，溶劑和小分子溶質(zhì)在濾過(guò)時(shí)不會(huì)因被膜吸附而產(chǎn)生損失，因此在樣品清洗、除蛋白以及其它需要回收濾過(guò)液的操作中，建議使用 |
Hydrosart超濾膜是賽多利斯的專利產(chǎn)品，它的基本特性與再生纖維素類似，具有極低的蛋白吸附特性的同時(shí)，又具有高流速和高通量的特性，是免疫球蛋白濃縮和脫鹽的理想用膜 |
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不同材質(zhì)及截留分子量(MWCO)的超濾膜性能比較
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| 超濾膜 |
相對(duì)流速(ml/min/cm2) |
性能特點(diǎn) |
聚醚砜，pH范圍1 ~ 14
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| 3,000 MWCO |
0.05 |
肽的回收率高 |
| 5,000 MWCO |
0.24 |
肽的回收率高，流速較快 |
| 10,000 MWCO |
0.41 |
應(yīng)用范圍廣，流速快，吸附低 |
| 30,000 MWCO |
0.41 |
應(yīng)用范圍廣，流速快 |
| 50,000 MWCO |
0.45 |
精確的截留分子量限 |
| 100,000 MWCO |
0.35 |
免疫球蛋白的收率高 |
三醋酸纖維素，pH范圍4 ~ 8
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| 5,000 MWCO |
0.04 |
去除肽和蛋白 |
| 10,000 MWCO |
0.11 |
微小組分，游離/結(jié)合藥物研究 |
| 20,000 MWCO |
0.58 |
樣品清洗，HPLC樣品制備 |
再生纖維素，pH范圍3 ~ 11
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| 10,000 MWCO |
0.18 |
微克量蛋白質(zhì)的高效回收 |
| 30,000 MWCO |
0.58 |
免疫球蛋白的快速和高效回收 |
| 100,000 MWCO |
0.40 |
蛋白質(zhì)梯度分離 |
Hydrosart，pH范圍3 ~ 11
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| 5,000 MWCO |
0.14 |
稀釋液的高效回收 |
| 10,000 MWCO |
0.27 |
流速快，收率高，吸附低 |
| 30,000 MWCO |
0.48 |
免疫球蛋白的收率高 |
*. 0.25mg/ml牛血清(BSA)或免疫球蛋白(IgG)，在4 bar壓力下，透過(guò)相應(yīng)MWCO膜所測(cè)得的流速
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不同截留分子量(MWCO)的超濾膜選擇指南
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| 應(yīng)用/分子量 |
<5,000 |
10,000 |
30,000 |
50,000 |
100,000 |
>300,000 |
| 細(xì)菌 |
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X |
X |
| DNA片段 |
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X |
X |
X |
X |
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| 酶 |
X |
X |
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| 生長(zhǎng)因子 |
X |
X |
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| 免疫球蛋白 |
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X |
X |
X |
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| 核酸 |
X |
X |
X |
X |
X |
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| 單克隆抗體 |
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X |
X |
X |
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| 寡聚核苷酸 |
X |
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| 肽 |
X |
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| 病毒 |
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X |
X |
X |
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| 酵母菌 |
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X |
X |
*. 為了得到最高的收率，所選濾膜的MWCO要小于或等于所需截留分子大小的一半
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賽多利斯的Vivascience系列超濾產(chǎn)品，采用了先進(jìn)設(shè)計(jì)和低吸附材質(zhì)，同時(shí)具有超濾速度快和收率高的優(yōu)點(diǎn)，當(dāng)超濾器的大小和膜的截留分子量選擇適當(dāng)時(shí)，回收濃度大于0.1mg/ml的溶質(zhì)，收率可達(dá)90%以上。大部分樣品損失是由于濾膜表面和樣品容器的非特異性吸附引起的。
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濾膜吸附
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濾膜表面樣品的吸附量，與樣品的性質(zhì)以及所選用的濾膜材質(zhì)有關(guān)，一般為2~10μg/cm2。如果研究的對(duì)象是濾過(guò)液，由于其濾過(guò)時(shí)要穿過(guò)濾膜的整個(gè)內(nèi)部結(jié)構(gòu)，所以吸附量相對(duì)較大，為20~100μg/cm2。通常截留分子量高的膜吸附較高，而截留分子量低的膜吸附較低。
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容器吸附
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生產(chǎn)超濾器時(shí)，通過(guò)選用低吸附材質(zhì)，精細(xì)拋光，已最大限度地降低了吸附性，但仍有一些溶質(zhì)會(huì)被容器內(nèi)壁吸附。與濾膜吸附相比，這種吸附的比例很小，但當(dāng)容器內(nèi)壁的表面積相對(duì)較大時(shí)，也可能成為產(chǎn)品損失的主要原因。
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如何提高收率
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當(dāng)需要較高的收率時(shí)，尤其當(dāng)研究的樣品對(duì)象在微克范圍時(shí)，建議應(yīng)考慮以下幾點(diǎn)：
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- 根據(jù)樣品處理量，選擇最小可用的超濾容器，可以充分利用Vivascience產(chǎn)品濾過(guò)速度快的優(yōu)勢(shì)，在小容器中反復(fù)添加樣品，反復(fù)超濾
- 在適量范圍內(nèi)，選截留分子量最低的超濾膜
- 如可能，使用水平轉(zhuǎn)頭代替角轉(zhuǎn)頭離心，這樣可減少在離心過(guò)程中溶液與離心管接觸的表面積
- 將壓力或離心力降低到大約最大推薦數(shù)值的一半
- 避免過(guò)度濃縮，最終體積越小，越難得到完全回收，如可能，在第一次回收后，用一滴或多滴緩沖液潤(rùn)洗容器，然后再次回收
- 用溶于蒸餾水中的5%SDS、Tween 20或Triton X預(yù)先浸泡超濾容器過(guò)夜，使用前徹底潤(rùn)洗
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